发光法支原体检测

简介：

        支原体是目前发现的*小的*简单的原核生物。支原体是寄生生物，但同時也具有腐生功能。许多种类的支原体可导致疾病，如肺炎支原体。
        在细胞培养中，经常出现支原体污染，并且很难被发现。支原体污染细胞后．培养液可不发生混浊．多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解．因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢．甚至从培养器皿脱落。
        目前常规的支原体检测方法耗时较长，且准确性较差。MycoAlert是利用支原体酶来检测支原体存在：支原体酶酶会在MycoAlert底物存在的情况下催化ADP转成ATP，而ATP可以通过荧光素酶反应来检测。样品在加入MycoAlert底物前后的发光值变化，反应了样品首支原体污染的程度。

原理：

检测方法：

以MycoAlert支原体检测试剂盒为例

1. 试剂准备
a) 按照说明书制备MycoAlert® Reagent，使用前平衡到室温
b) 按照说明书制备MycoAlert® Substrate，使用前平衡到室温

2. 样品准备
取2ml细胞培养基，离心后取100ul上清

3. 检测发光
a) 将100ul的MycoAlert® Reagent与100ul细胞上清混合，孵育5min
b) 反应液放入发光检测仪检测发光值，得到读值A
c) 在反应液中再加入100ul的MycoAlert® Substrate，孵育10min
d) 然后放入发光检测仪检测发光值，得到读值B
e) 读值B与读值A的比值，反映了支原体污染的程度。

参考文献：

1. Miller,J., Kassem,S., Pepper,S.D., Hey,Y., Ward, T. H., and Margison,G.P. (2003) Mycoplasma infection significantly alters microarray gene expression profiles. Biotechniques, 35(4): 812-814.

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