RNA干涉（RNAi）效率发光法检测

简介：

        RNAi (RNA interference) 即RNA干涉，是由双链RNA（dsRNA）介导的、由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。在RNAi研究中，我们可以人工合成特定的dsRNA，对目的基因进行干涉。但设计的dsRNA不同，实际干涉效果差异很大。所以有时候就需要筛选dsRNA片断。

        PsiCHECK载体将RNAi与荧光素酶发光相偶联：当RNAi有效时，转录的荧光素酶RNA将被降解，无发光反应；当RNAi无效时，转录的荧光素酶RNA将翻译为荧光素酶，并参与发光反应。通过检测发光即可反应RNAi的效果。

        以PsiCHECK-2载体为例：将RNAi的靶片段插入到hRlu片段下游的多克隆位点中，然后将构建好的载体与特定的dsRNA片段或能转录dsRNA的载体共转染进细胞；转然后，细胞培养一定时间，裂解细胞使用发光检测的方法检测荧光素酶的表达情况。

原理：

 

检测方法：

详见附录

参考文献：

1. Kumar, R., Conklin, D.S. and Mittal, V. (2003) High-throughput selection of effective RNAi probes for gene silencing. Genome Res. 13, 2333–40.
2. Brummelkamp, T.R., Bernards, R. and Agami, R. (2002) A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cell. Science 296, 550–3.

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