Kinase-Glo™激酶活性检测试剂盒在Veritas微孔板发光检测仪上的应用

Kinase-Glo™激酶活性检测试剂盒在Veritas微孔板发光检测仪上的应用
Turner Biosystems公司的Veritas ™微孔板发光检测仪和Kinase-Glo™激酶活性检测试剂盒联合使用为激酶反应后溶液中ATP 的定量提供了一种方便、快速且灵敏的方法。激酶是根据初始识别对特定氨基酸进行磷酸化的一大类酶，因此蛋白激酶在细胞信号传导和药物研究靶目标中起着关键性的作用，科学的发展也进一步验证了激酶在药物导向方面有着潜在应用价值，例如丝氨酸/苏氨酸，cAMP依赖物，酪蛋白和MAP 激酶被明确地用于药物的研究。
Kinase-Glo™激酶活性检测试剂盒是一种通过激酶和底物反应，均质荧光素酶检测方法。激酶底物可以是多肽、蛋白或脂肪。荧光素酶通常被用于研究培养细胞的生物学特性，由于哺乳动物细胞中无内源荧光素酶，在荧光素酶基础上进行激酶分析会更快速、可靠和方便。Kinase-Glo™激酶检测试剂盒中使用UltraGlow™荧光素酶可以产生长达4h 稳定的辉光型信号。长时间的光信号使多板高通量筛选成为可能。
荧光素酶反应中需要ATP 的参加，激酶磷酸化反应中也需要消耗ATP，当激酶反应结束，加入等体积的Kinase-Glo™测量发光信号，光信号和体系中的ATP 成正比，和体系中激酶活性成反比（图1）。为了得到*佳检测结果，试剂盒使用中，强烈建议进行参数优化。