GFP绿色荧光蛋白定量检测

简介：

        绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequoria victoria)中分离出一种分子量为20kD的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。
        GFP具有多种优点：易于检测，灵敏度高；荧光性质稳定，耐受性强；易于表达，无细胞毒性；可用于活细胞检测。因此，GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控，或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器。

原理：

检测方法：

1、实验准备

•  Modulus单管型多功能检测仪
•  Blue荧光模块(P/N 9200-040)
•  微量适配器(P/N 9200-928)
•  纯化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）
•  200ul加样器与20ul加样器
•  TE Buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)
•  1.5ml离心管

2、.仪器准备
2.2 打开Modulus的电源，仪器预热1min
2.3 按照说明插入微量适配器

3.、制备标准曲线

3.1 对rAcGFP1进行系列稀释
3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意：避免在微量比色杯中出现气泡，负责会引起检测误差。.
3.3 将微量比色杯插入到微量适配器中，点"Measure Fluorescence Raw."检测
3.4 记录检测结果，对其他样品重复4.2-4.3的步骤
3.5 利用荧光值（FSU）与样品浓度做出标准曲线

4、 校准

4.1 使用Modulus检测未知样品前，你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Modulus仪器
4.2 使用表1中的5个稀释液来校准Modulus。选择"ng/µL"作为测量单位，使用0 ng/µL 作为空白标准；为了尽可能准确，使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。
4.3 保存校准，可供以后调用 (可选).
4.4 使用"Measure Fluorescence."开始检测未知样品。注意：在校准后就无需再做标准曲线。
4.5 样品浓度将直接在屏幕上显示.

参考文献：

1. 无

*如果您在实验中遇到任何问题, 请与我们的技术人员沟通, 我们将提供最大程度的帮助.
联系电话: 010-82888900转803 电子邮箱: lumflu@yph-bio.com