用于DNA定量检测的Hoecsht 33258荧光染料在TBS-380 微型荧光计上的应用

用于DNA定量检测的Hoecsht 33258荧光染料在TBS-380 微型荧光计上的应用
DNA定量在许多分子生物学实验中是首要步骤。所有用到DNA的技术，例如DNA测序、cDNA合成、克隆、转录、转染、核酸标记（例如随机引物标记法）等，均需要明确知道模板浓度。DNA模板定量不准确往往会导致这些实验失败。
测量核酸浓度*常用的方法是用分光光度法测定其在260 nm (A-260)下的吸光值。双链DNA的消光系数是 (1A260 = 50 µg/mL)，单链DNA的消光系数是(1A260 = 33 µg/mL)、RNA的消光系数是(1A260 = 40 µg/mL) ，消光系数常被用来直接从这个波长下的吸光度来定量核酸浓度。为获得精确的结果， 吸光值应该在0.05 - 0.10之间。测量1.0 mL样品，需要2.5 - 5.0 µg双链DNA。对于低浓度核酸溶液样品，样品中含有的其他化合物在260 nm下对吸光值不应该有显著影响。由于这些局限，更灵敏、受背景吸光值影响更小的新技术已经开发出来。